ABSTRACT
The aim of this study was to compare some DNA extraction methodologies for Aegla longirostri. The protocols were based on the traditional phenol-chloroform DNA extraction methodology and using a commercial kit for DNA extraction. They differed in tissues used, the addition - or not - of beta-mercaptoethanol to the lysis buffer, times and methods for the animal's conservation (frozen, in ethanol or fresh). Individuals stored at -20°C for a long time supplied lower molecular weight DNA than those stored for a short time. The best yield for the specimens preserved in ethanol was obtained for 15 days storage in 95 percent ethanol. The kit resulted in a low quantity of high molecular weight DNA. The best protocol for DNA extraction from Aeglidae, and probably for other crustaceans should, therefore, utilize fresh specimens, with addition of beta-mercaptoethanol to the lysis buffer.
Marcadores moleculares são ferramentas úteis para esclarecer dúvidas a respeito dos Aeglidae, único grupo de crustáceos Anomura de água doce. Essas técnicas dependem da obtenção de DNA de boa qualidade e sem contaminantes. O objetivo deste estudo foi comparar algumas metodologias de extração de DNA de Aegla longirostri. Quatorze protocolos foram analisados, baseados na metodologia tradicional de extração de DNA com fenol-clorofórmio, exceto o protocolo K no qual se utilizou um Kit. Os procedimentos diferiram quanto aos tecidos utilizados e a adição de beta-mercaptoetanol ao tampão de lise. Avaliaram-se também diferentes tempos e maneiras de conservação. Indivíduos congelados apresentaram maior degradação do material obtido conforme o tempo em que ficaram congelados. Para os indivíduos conservados em álcool, aqueles mantidos em etanol 95 por cento forneceram material de melhor qualidade. A utilização do Mini Kit resultou em uma quantidade muito pequena de DNA de alto peso molecular. O melhor protocolo para extração de DNA de Aeglidae utilizou músculos e brânquias, de indivíduos frescos com adição de beta-mercaptoetanol ao tampão de lise.
ABSTRACT
Inúmeros trabalhos têm demonstrado que linfócitos de pacientes com síndrome de Down apresentam uma maior freqüência de aberraçöes cromossômicas quando expostos a radiaçäo ionizante ou agentes químicos nas fases G0 ou G1 do ciclo celular, mas näo em G2, quando comparados com controles normais. Para determinar a sensibilidade de linfócitos de pacientes com síndrome de Down, na fase G2, usou-se o radiomimético bleomicina em culturas de linfócitos de 24 pacientes. Todos os pacientes mostraram trissomia livre do cromossomo 21 (47,XX + 21 ou 47, XY + 21). Indivíduos que apresentaram freqüência média de quebras cromatídicas por célula superior a 0,8 foram considerados sensíveis a droga. Nenhum controle apresentou suscetibilidade a bleomicina e entre os 24 pacientes com síndrome de Down somente um foi sensível à droga. Näo se observou qualquer diferença significativa entre os dois grupos em relaçäo as freqüências de quebras cromatídicas em linfócitos em G2, o que está de acordo com outros trabalhos. A distribuiçäo das quebras induzidas pela bleomicina, em cada grupo cromossômico, foi igual para pacientes e controles. Nenhuma diferença significativa foi observada na resposta a bleomicina entre homens e mulheres, nos dois grupos. Provavelmente, o principal fator envolvido na sensibilidade cromossômica de linfócitos de pacientes com síndrome de Down seja a fase do ciclo celular na qual a célula é tratada.
Subject(s)
Humans , Male , Female , Infant , Child, Preschool , Child , Bleomycin/pharmacology , Down Syndrome , G2 Phase/drug effects , Lymphocytes/drug effects , Radiation, IonizingABSTRACT
Foram analisadas as freqüencias de quebras cromatídicas em metáfases obtidas a partir da cultura de linfócitos, em 16 pares de gêmeos monozigóticos (MZ) e 16 pares de gêmeos dizigóticos (DZ) normais. Foram ainda analisadas as freqüências de quebras cromatídicas induzidas pela bleomicina (BLM), na concentraçäo final de 0,03 unidade/ml de cultura. Observou-se uma diferença intrapar, altamente significante, na freqüência de quebras entre gêmeos dizigóticos e monozigóticos, antes e depois do tratamento com BLM. O coeficiente de herdabilidade foi de 85,5 por cento, e concluiu-se que fatores genéticos contribuem significativamente para a variaçäo individual que foi observada na freqüência de quebras induzidas pela bleomicina.